Metode 1: Ekstraktionsmetode (metoden, der i øjeblikket anvendes i mit land; den giver lavere renhed, men giver lavere produktionsomkostninger.)
Ekstraktion af oxytocinopløsning: Tag 100 g tørret hypofysepulver og 30 g kvartspulver, anbring dem i en kuglemølle og tilsæt destilleret vand. Udfør ekstraktionen fire gange ved at bruge samme procedure. Mængderne af destilleret vand tilsat for hvert trin er som følger: 1,4 L for de første to ekstraktioner og 1,3 L for de efterfølgende to. Hver ekstraktion udføres i 45 minutter, efterfulgt af centrifugering for at opsamle væsken; den resterende rest udsættes derefter for yderligere ekstraktion. De fire resulterende ekstrakter kombineres for at give oxytocinopløsningen. Sammenfattende: Tørret posterior hypofysepulver [vand, kuglemølle] → Oxytocinekstrakt → kromatografisk adskillelse.
Tag 1.500 g for-behandlet syntetisk zeolit, tilsæt 20 L af en 0,25 % eddikesyreopløsning, og-efter omrøring-hæld blandingen i en ion-søjle. Når niveauet af eddikesyreopløsningen er faldet til et punkt 2-3 cm over overfladen af zeolitlejet, skal du straks indsætte oxytocinekstraktet. Oprethold en passende strømningshastighed og opsaml det resulterende hvide, uklare eluat (denne fraktion indeholder primært oxytocin; da oxytocin har et isoelektrisk punkt [pI] på 7,7-, hvorimod vasopressin har en pi på 10,9-vasopressin danner let positive ioner og adsorberes således på søjlen). Så snart væskeniveauet i ekstraktet falder til overfladen af zeolitlejet, tilsættes straks destilleret vand og fortsætte med at opsamle det uklare eluat, indtil strømmen ophører. Juster pH af det opsamlede uklare eluat til 3,5 ved hjælp af iseddike. Opvarm opløsningen hurtigt i et vandbad til 95 grader, hold denne temperatur i 3 minutter, afkøl derefter opløsningen hurtigt og stil den i køleskab natten over. Sammenfattende: Oxytocinekstrakt [HAc, Syntetisk Zeolitsøjle] → Uklar eluat [HAc, Opvarmning] → Separeret opløsning → Adsorption og eluering. Den følgende dag filtreres den nedkølede opløsning. Til filtratet tilsættes en 10 % bentonit-opslæmning under omrøring (tilsæt 3 ml opslæmning pr. 100 ml filtrat). Fortsæt med at omrøre i 1 time for at lette adsorptionen, og centrifuger derefter blandingen. Test supernatantvæsken med en sulfosalicylsyrereagensopløsning; fraværet af noget bundfald indikerer, at adsorptionsprocessen er afsluttet. Hvis adsorptionen er ufuldstændig, gentag bentonitbehandlingsprocessen; derefter kombinere bentonitpræcipitaterne opnået fra begge adsorptionstrin. Bentonitten elueres fire gange under anvendelse af 1 % eddikesyre (med volumener på henholdsvis 1,6 L, 1,4 L, 1,2 L og 0,8 L). For hvert eluat tilsættes *tert*-butyltrichlorid, når opløsningen er opvarmet til 80 grader; temperaturen hæves derefter til 95 grader, afkøles hurtigt til 25 grader og enten filtreres eller centrifugeres. De fire resulterende filtrater kombineres for at bestemme styrken og vasopressingrænsen. Procesflowet er som følger: Kølet opløsning [Filtrering] → Filtrat [Bentonitopslæmning] → Adsorbat [1 % HAc] → Eluat. Forberedelse af oxytocininjektion:
Den analyserede oxytocinopløsning, der opfylder kvalitetsstandarder, fortyndes til en koncentration på 5 U/ml eller 10 U/ml. Det filtreres derefter gennem en No. 4 eller No{4}} sintret glastragt, fyldes i ampuller og steriliseres ved hjælp af flydende damp ved 100 grader i 30 minutter for at give det endelige produkt. Procesflowet er som følger: Oxytocinopløsning (assay godkendt) [Filtrering, påfyldning, sterilisering] → Oxytocininjektion.
Regenerering af syntetisk zeolit: Den syntetiske zeolit vaskes to gange med destilleret vand. Derefter tilsættes 1,5 l vand (beregnet baseret på 500 g zeolit) og 150 g natriumchlorid, og blandingen omrøres i 2 timer for at vaske væk og fjerne vasopressin. Zeolitten vaskes derefter med destilleret vand, indtil der ikke er nogen chloridioner tilbage. En passende mængde vand tilsættes, og pH-værdien justeres til 9 under anvendelse af natriumhydroxid; blandingen omrøres i 30 minutter, hvorefter supernatanten dekanteres. Zeolitten vaskes med destilleret vand, pH-værdien justeres til 5,5-6 med svovlsyre, og den vaskes igen med vand, indtil den er næsten neutral. Det filtreres derefter for at fjerne overskydende vand og tørres ved 105 grader til fremtidig brug. Før brug tilsættes en passende mængde vand, og pH-værdien justeres ved hjælp af iseddike under omrøring for at tillade iblødsætning. Fremstilling af 10 % bentonitopslæmning: Bentonit og vand blandes i et masse--til{18}}volumenforhold på 1:10. Blandingen formales i ca. 1 time, i hvilket tidsrum eddikesyre tilsættes for at opretholde en stabil pH på 3,5. Den resulterende opslæmning opbevares derefter i et køleskab til fremtidig brug. Metode 2: Kemisk syntese. Først syntetiseres heptapeptidamidet (segment 3-9) ud fra benzyloxycarbonyl-leucin *p*-nitrophenylester; derefter syntetiseres benzyloxycarbonyl-S-benzylcystein-tyrosinazid (segment 1-2); og i det tredje trin syntetiseres oxytocin.